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维(wei)通(tong)达公司拥有4种主要基因修饰(shi)技术，可根据您(nin)的(de)实验要求，量(liang)身设计方案，采用合适(shi)的(de)编(bian)辑方法，准确，高效的(de)制备目标动物(wu)模型。
ES细(xi)胞是(shi)全能胚胎(tai)干细(xi)胞，该细(xi)胞可以通过(guo)胚胎(tai)嵌合，获(huo)(huo)得(de)ES细(xi)胞来源(yuan)的小鼠(shu)(shu)。因(yin)此可以在ES上进行(xing)基因(yin)编辑(ji)，获(huo)(huo)得(de)基因(yin)修(xiu)饰小鼠(shu)(shu)。该方法在CRISPR等技术出现之前，是(shi)主流获(huo)(huo)得(de)靶向基因(yin)修(xiu)饰小鼠(shu)(shu)的方法。
技术(shu)一(yi)般的流程
载体构建→ 电转ES→ 克(ke)隆鉴(jian)定→ 嵌(qian)合鼠(shu)制备→ ES小鼠(shu)获得
图1 经典ES打靶制(zhi)备基因修(xiu)饰小鼠(shu)模(mo)型流程，目前维通达可提供(gong)2种遗传背景的(de)小鼠(shu)ES细胞：C57BL/6，B6;129。
EPS细胞是一种(zhong)全能(neng)性比(bi)普(pu)通ES更高的干细胞。相比(bi)于(yu)普(pu)通ES具有种(zhong)系传递能(neng)力强，打靶效率高的特点。它(ta)可(ke)以有效缩短基因小鼠制(zhi)备周期(qi)，降低制(zhi)备费用。在制(zhi)备基因敲入(ru)，条件敲除方面，效率显著高于(yu)CRISPR法，更为重要的是不(bu)受敲入(ru)片(pian)段大(da)小限制(zhi)，是一种(zhong)新型高效的基因修饰大(da)小鼠制(zhi)备策略。
图(tu)1 EPS制备基因(yin)修饰小(xiao)鼠(shu)流程(cheng)图(tu)。
技术优(you)势或适合应用的研(yan)究
-在制备基因敲入，条件敲除方面，效率显著高于CRISPR/Cas9法。
-更为重要的是不受敲入片段大小限制。
-对于需要多次打靶的复杂动物模型，制备周期更短。
ES VS. EPS细胞打靶技术
EPS：维通达研究(jiu)EPS技术，成功(gong)将EPS应用(yong)于基因编(bian)辑小鼠快速制(zhi)备中，EPS是(shi)潜能拓展的多功(gong)能干细(xi)胞，2017年(nian)在(zai)cell上(shang)发表该项研究(jiu)成果，期刊号：169(2):243-257.e25.
-ES打靶效率一般在百万分之一的级别，与之相比，EPS基因打靶效率提高几十倍到上百倍。
-同时EPS因为更高的全能性，具有更强的种系传递能力，低至1颗EPS细胞，就可一步获得嵌合效率接近100%的ES小鼠，省去种系传递过程（三个月）。
-与CRISPR辅助技术相比，使用EPS细胞不再受限于敲入片(pian)段大小，周期可控，结果可预(yu)测。
EPS和ES策(ce)略流(liu)程：
CRISPR/Cas9能够靶向(xiang)基(ji)因组(zu)(zu)的特定(ding)序列(lie)，并且(qie)将(jiang)DNA双链打断(duan)，引发非同(tong)源(yuan)(yuan)末端(duan)修复，提高同(tong)源(yuan)(yuan)重(zhong)组(zu)(zu)修复效率。可用于基(ji)因敲(qiao)(qiao)(qiao)除，小片段基(ji)因敲(qiao)(qiao)(qiao)入和基(ji)因条件敲(qiao)(qiao)(qiao)除等基(ji)因编辑(ji)。
技术一(yi)般的流程
载体(ti)构建→设计制备gRNA→微(wei)(wei)注射→出生小(xiao)鼠检测→阳性小(xiao)鼠获得。
技术优势或适合(he)应用的(de)研究
-高效率基因敲除，双gRNA策略能够删除大片段DNA，从几十bp到Mb，几乎没有长度限制。
-基因敲入严重依赖片段长度，1kb以上，敲入效率急剧下降。
-点突变等小范围基因编辑效率高。
成功案例
图(tu)1 双gRNA切割，片段敲除基因方(fang)案设(she)计(ji)。
图2 两个(ge)Grna切割位(wei)点之间(jian)的~550bp基(ji)因序(xu)列(lie)被高效率敲除，相(xiang)对(dui)于野生(sheng)带(dai)(dai)773bp，发生(sheng)敲除的鼠PCR产生(sheng)~220bp的条带(dai)(dai)。
脂质体(ti)细胞(bao)转基(ji)(ji)因(yin)方法(fa)(fa)是常(chang)用(yong)的(de)方法(fa)(fa)，但对(dui)于一些(xie)肿瘤细胞(bao)系(xi)，效(xiao)率极低。病(bing)毒(du)(du)(du)转基(ji)(ji)因(yin)成为有效(xiao)的(de)替代方案，常(chang)用(yong)的(de)有慢病(bing)毒(du)(du)(du)，腺(xian)(xian)病(bing)毒(du)(du)(du)方法(fa)(fa).慢病(bing)毒(du)(du)(du)会把外源基(ji)(ji)因(yin)整(zheng)合到细胞(bao)，常(chang)用(yong)来建立转基(ji)(ji)因(yin)细胞(bao)系(xi)、细胞(bao)荧光标(biao)记等用(yong)途。腺(xian)(xian)病(bing)毒(du)(du)(du)不整(zheng)合到基(ji)(ji)因(yin)组(zu),可以用(yong)来瞬时转染细胞(bao)。腺(xian)(xian)病(bing)毒(du)(du)(du)制备较慢病(bing)毒(du)(du)(du)复杂，周期长。
图1 通过慢(man)病毒(du),把luciferase转到Raji细胞,建立稳转细胞系。
