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保种服务是指，通过在液氮中保存实验动(dong)物的配子(zi)或胚胎，从而实现以较小的成(cheng)(cheng)本维持动(dong)物模型核心种群的方法。维通达通过冻存精子(zi)，胚胎或卵(luan)巢组织，需要时(shi)再复苏成(cheng)(cheng)活体动(dong)物，确(que)保客户种质资源的安全。
1.胚(pei)胎冻存
胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)冻存(cun)(cun)是(shi)安全的保(bao)存(cun)(cun)实验动物品系的方法。影响胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)冷冻保(bao)存(cun)(cun)成功的三个重要(yao)方面包括(kuo)：①胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)的数量(liang)；②复苏(su)后存(cun)(cun)活胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)的数量(liang)；③胚(pei)(pei)胎(tai)(tai)移(yi)植后存(cun)(cun)活的成年动物数量(liang)。
维通达建议客户(hu)每个(ge)品系冻存(cun)(cun)约(yue)200~300枚(mei)2cell、8cell或(huo)桑囊胚(pei)时期的胚(pei)胎(tai)，每管30枚(mei)左右，即8~10管胚(pei)胎(tai)放入液氮中保存(cun)(cun)。胚(pei)胎(tai)的来源(yuan)，既可(ke)(ke)(ke)以通过超数(shu)排卵(luan)的方(fang)法(fa)，或(huo)者(zhe)通过体(ti)外受(shou)精（IVF）的方(fang)法(fa)获得。当然，也(ye)可(ke)(ke)(ke)以与品系净化(hua)结合起(qi)来，这样可(ke)(ke)(ke)以节约(yue)获得足量数(shu)目(mu)胚(pei)胎(tai)的准备(bei)成本。
该技术的流程包(bao)括：
①胚(pei)(pei)胎采集。维通达(da)建议(yi)冻(dong)存2-cell胚(pei)(pei)胎。若2-cell胚(pei)(pei)胎复(fu)苏效果不佳，再(zai)考(kao)虑冻(dong)存8cell或桑囊胚(pei)(pei)时期的胚(pei)(pei)胎。
②胚胎清洗。我们(men)采用国际胚胎移植(zhi)协(xie)会(hui)的(de)建(jian)议方案进行清洗，目的(de)是防止胚胎被微生物感染。
③胚胎冻存(cun)(cun)。采用玻璃化冷冻进(jin)行，按(an)照(zhao)标准的(de)流程经过冻存(cun)(cun)保(bao)护液处理后(hou)，投入液氮保(bao)存(cun)(cun)。
④复苏(su)验证。冻存(cun)一周后，我们(men)取出1支验证管的胚(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)进行复苏(su)，若(ruo)胚(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)存(cun)活(huo)率(lv)和囊(nang)胚(pei)(pei)(pei)发育率(lv)20~100%（野生型B6小鼠(shu)胚(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)复苏(su)率(lv)在80%以上，不同品系间存(cun)在差异(yi)），或胚(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)移植后有(you)健康小鼠(shu)出生，表(biao)明胚(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)冷冻保(bao)存(cun)成功(gong)。若(ruo)2-cell复苏(su)存(cun)活(huo)率(lv)小于50%，我们(men)会及时与客户沟通，更改为8-cell或桑囊(nang)胚(pei)(pei)(pei)期胚(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)冻存(cun)。
⑤长(zhang)期保(bao)存(cun)。验证(zheng)保(bao)存(cun)成功的品系(xi)，放入专用的胚胎保(bao)存(cun)液氮罐中(zhong)（一般(ban)分布(bu)于2个液氮罐），长(zhang)期保(bao)存(cun)。
2.精子(zi)冻存
精(jing)子(zi)冻存(cun)(cun)，在(zai)保(bao)种服务中广泛(fan)应用，其优势在(zai)于技术成熟，成本低，容(rong)易操作等特(te)点。通过(guo)无菌手术分(fen)离(li)可育(yu)雄(xiong)鼠的(de)(de)附睾，在(zai)特(te)定的(de)(de)溶液进行精(jing)子(zi)的(de)(de)游离(li)，并加入专用的(de)(de)冷冻保(bao)护液，通过(guo)麦管冷冻保(bao)存(cun)(cun)在(zai)液氮(dan)中。
建议客户每个品系提(ti)供2~3只12周至4月龄的(de)可育成年小鼠，冻存15~20支麦管(guan)的(de)精液(ye)。
3.品(pin)系恢复
在(zai)基因修饰动物模(mo)型的(de)使(shi)用(yong)过(guo)程中，由(you)(you)于(yu)各种原因造成(cheng)该品(pin)系的(de)繁育出现障碍，如由(you)(you)于(yu)老(lao)龄化造成(cheng)精子活力的(de)降(jiang)低，或由(you)(you)于(yu)疾病或意外造成(cheng)繁育期动物生命(ming)垂危(wei)，这时可(ke)以通过(guo)维通达(da)提供(gong)胚(pei)胎复苏(su)、精子复苏(su)，或者辅助生殖(zhi)技术进行动物品(pin)系的(de)恢复。
（1）胚(pei)胎(tai)复苏(su)
冻(dong)存的(de)胚胎按照标准(zhun)程序复苏后，移植到(dao)代(dai)孕大小鼠的(de)输卵管或子(zi)宫内(nei)，得到(dao)活体后代(dai)的(de)过程。
（2）精(jing)子(zi)复苏
体(ti)外受(shou)精是指将(jiang)成熟的卵子和获能的精子在体(ti)外进行受(shou)精的过(guo)程。维通达(da)有丰富的作体(ti)外受(shou)精的经验，建议精子活(huo)力大(da)于30%时，直接采用体(ti)外受(shou)精方法复(fu)苏后代。
（3）辅助(zhu)透明带切(qie)开体外受精(jing)
辅(fu)助透(tou)(tou)明带切开是指获得(de)的精(jing)(jing)子活力小于(yu)30%时，精(jing)(jing)子不能顺利穿(chuan)过透(tou)(tou)明带，采用传统的方(fang)法不能得(de)到受精(jing)(jing)卵(luan)时，对卵(luan)母(mu)细胞的透(tou)(tou)明带进(jin)行打孔或切开，从而获得(de)受精(jing)(jing)卵(luan)的方(fang)法。维(wei)通达可以采用Xyclone激光(guang)破膜仪进(jin)行透(tou)(tou)明带打孔，或者用专用的尖针将透(tou)(tou)明带切开，两种(zhong)方(fang)法均可得(de)到较高的受精(jing)(jing)率。
